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气相色谱分析方法的建立步骤

时间:2020-12-10 来源:计量校准点击:次

气相色谱分析方法的建立步骤

1.样品的来源和预处理方法

气相色谱可直接分析的样品必须是气体或液体，固体样品在分析前应溶解在适当的溶剂中。而且要保证样品中不含有不能被GC分析的成分(如无机盐)，可能会损坏色谱柱的成分。这样，当我们收到一个未知的样品时，我们就必须知道它的来源，从而估计出样品可能的成分和样品的沸点范围。如果能确认样品可以直接分析。如果样品中存在不能用GC直接分析的成分，或者样品浓度过低，必须进行必要的预处理，包括一些预分离手段，如各种提取技术、浓缩稀释方法、纯化方法等。

2.确定仪器配置

所谓仪器配置，是指用什么样的采样装置、载气、色谱柱、检测器来分析样品方法。

3.确定初始运行条件

计量校准当样品准备好并且仪器配置确定后，可以开始暂时分离。此时需要确定初始分离条件，主要包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度和载气流速。进样量应根据样品浓度、色谱柱容量和检测器灵敏度来确定。当样品浓度不超过毫克/毫升时，填充柱的进样量通常为1-5uL，而对于毛细管柱，如果分流比为50: 1，进样量一般不超过2uL。入口温度主要由样品的沸点范围决定，还应考虑色谱柱的工作温度。原则上，入口温度较高是有利的，通常接近样品中最高沸点组分的沸点，但低于分解温度。

4.分离条件的优化

分离条件优化的目的是在最短的分析时间内获得满意的分离结果。当改变柱温和载气流速不能达到基线分离的目的时，应更换较长的柱，甚至更换不同固定相的柱，因为在气相色谱中，柱是分离成败的关键。

5.定性鉴定

定性鉴别是确定色谱峰的归属。对于简单样品，可通过标准物质控制进行识别。即在相同的色谱条件下，标准样品和实际样品分别进样，根据保留值可以确定色谱图上哪个峰是待分析的组分。必须注意，不同的化合物在同一色谱柱上可能具有相同的保留值，因此仅使用一个保留数据来表征未知样品是不够的。在气相色谱方法中，双柱或多柱保留指数更可靠，因为不同化合物在不同色谱柱上具有相同保留值的概率要小得多。

6.定量分析

确定使用何种定量方法来确定待测成分的含量。常用的色谱定量方法无非是峰面积(峰高)百分比法，归一化法，内标法法，外标法法和标准加入量法(也叫叠加法)。峰面积(峰高)百分比法最简单，但最不准确。只有当样品由同系物组成时，法才是可选的，或仅用于粗略定量。相比之下，内标法的定量准确度最高，因为它是通过相对于标准物质的响应值(称为内标物)进行定量的，在标准样品和未知样品中分别加入内标物，以抵消操作条件(包括进样量)波动带来的误差。法，标准加入是将待测物的标准物质定量加入未知样品中，然后根据峰面积(或峰高)的增加进行定量计算。样品制备过程类似于内部标准

所谓方法验证，就是为了证明所开发的方法的实用性和可靠性。实用性一般是指使用的仪器配置是否都可以作为商品购买，样品处理方法是否简单易操作，分析时间是否合理，分析费用是否能被同行接受。可靠性包括定量线性范围、检出限、方法回收率、重复性、再现性和准确性。