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荧光分光光度计检定规程及计量校准注意事项

时间:2020-12-26 来源:计量校准 点击:

荧光分光光度计检定规程及计量校准注意事项
 
  荧光分光光度仪是一种扫描液体荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供许多物理参数,包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等。从各个角度反映分子的成键和结构。通过测量这些参数,我们不仅可以进行一般的定量分析,还可以推断分子在各种环境中的构象变化,从而阐明分子结构与功能的关系。荧光分光光度仪的激发波长扫描范围一般为190 ~ 650纳米,发射波长扫描范围为200 ~ 800纳米。可用于液体和固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。
  荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、样品用量少、方法简单、工作曲线线性范围宽的优点,可广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。
  荧光分光光度计的仪器校准工作原理:物质的荧光是由正常情况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态而产生的。这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中一部分能量以光的形式释放出来,从而产生荧光。由于分子结构的不同,不同物质的激发态能级分布具有不同的特征,这体现在荧光上,即所有物质都有自己特有的荧光激发和发射光谱。因此,不同的荧光激发和发射光谱可用于定性识别物质。在溶液中,当荧光物质浓度较低时,荧光强度与物质浓度通常有很好的比例关系,即F=kc,可用于荧光物质的定量分析。与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常采用标准曲线法进行。
  荧光分光光度仪校准注意事项:
  1.我知道荧光分光光度计有两个单色仪,即激发单色仪系统和发射单色仪系统。在规定中,根据仪器使用的单色仪类型不同,分为A类(色散单色仪)和B类(滤光单色仪),两类仪器的技术指标也不同。目前,大多数荧光分光光度计采用色散单色仪,这种仪器更方便、更灵敏。所以可以参考A类仪器的校准方法和技术指标。
  第二,校准氙灯照明方法时,需要将没有荧光的白色滤纸条放入样品室,但必须注意,要戴一次性手套,因为用手清洁滤纸会被荧光染色。
  第三,在标定萘峰位置的方法时,我发现法规要求的10-4萘-甲醇溶液浓度过高,使得响应值超出范围,无法显示。因为我记得日立产的老仪器可以做响应值,可以测萘峰,但是这个仪器是新的PE仪器,灵敏度比以前的老仪器高几个档次。下次我要拿10-7萘-甲醇溶液做确认试验。
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